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    你知道選購色譜柱的時候要考慮哪些因素嗎?

    更新時間:2023-12-27

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      色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分,相當于人體的“心臟”。根據自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱,需要考慮不同參數將會造成什么影響,比如粒徑、酸堿性、極性和分子量大小等。
     
      只有了解影響分析柱性能的因素,才能結合目標分析物的性質、需要達到的分析效果及實驗室條件來選擇適合的色譜柱。
     
      一、硅膠基質填料
     
      1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團,如胺基和氰基的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正己烷,氯仿,二氯甲烷等。
     
      2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分zui先被沖洗出,而極性較弱的組分在色譜柱上有更強的保留。常用的反向填料有C18、C8、C4等。
     
      二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要優點是在PH值為1-14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效?,F有的聚合特填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
     
      三、其它無機填料 其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化,由于其特殊的性質,一般于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,由于在HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在PH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強,應用范圍受到一定限制,所以未能廣泛應用。新型色譜氧化鋯基質填料也可用于HPLC。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH1-14,溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行之中。
     
      柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱,即相同的塔板數或分離能力,但是柱長更短,以縮短分析時間。另外,可以彩用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色譜柱的壓力。
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